Что нужно сделать чтобы пцр был отрицательный

(c) Управление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Красноярскому краю, 2006-2021 г.

Адрес: 660049, г.Красноярск, ул. Каратанова, д. 21

Тел.: 8 (391) 226-89-50 (многоканальный), 8 (495) 380-28-43 (для звонков из Москвы). Телефон «горячей линии»: 8 (391) 226-89-50, Телефон доверия по вопросам противодействия коррупции: 8 (391) 226-89-93, факс: 8 (391) 226-90-49

Источник

«Цена ошибки высока». От чего зависит результат ПЦР-тестов на коронавирус

МОСКВА, 6 дек — РИА Новости, Татьяна Пичугина. Недавняя публикация ученых из Сеченовского университета о том, что почти половина анализов на возбудителя COVID-19 не дают реальной картины, вызвала множество вопросов. Насколько точны ПЦР-тесты и нужны ли они для диагноза? РИА Новости разбирается в ПЦР-диагностике и почему в нее закрадываются ошибки.

Как выявляют вирус в организме

«Тяжело заболел наш сотрудник. Поднялась высокая температура, положили в больницу. Все признаки COVID-19, — рассказывает Алексей Чемерис, доктор биологических наук, профессор, сотрудник Института биохимии и генетики Уфимского ФИЦ РАН. — А ПЦР-анализ, который ему сделали в специальном медицинском центре наши коллеги-профессионалы, как только он почувствовал недомогание, — отрицательный. Видимо, в тот момент у больного было мало вирусных частиц в организме — за пределами чувствительности теста».

Ученые называют такие результаты ложнонегативными — инфекция проявляется внешне, а тест на возбудителя — «чистый». Тут дело и в самом методе, и в его массовом применении.

Когда медсестра берет мазок из ротоглотки и носоглотки, на кончике зонда остается немного влаги, а в ней — клетки эпителия. Зонд опускают в пластиковую пробирку с раствором (эппендорф) и кончик отламывают, чтобы закрыть емкость. В лаборатории ее помещают в центрифугу, проводят ряд манипуляций для выделения из клеток фрагментов вирусного генома. В случае с COVID-19 — это РНК коронавируса SARS-CoV-2.

В образовавшийся раствор добавляют праймеры — искусственные участки генома коронавируса, именно они опознают SARS-CoV-2, и один из них служит затравкой для синтеза цепочки ДНК под действием определенного фермента на основе механизма обратной транскрипции. Фактически получается ДНК-копия участка коронавируса, которую уже можно размножать. Для этого запускают ПЦР — полимеразную цепную реакцию. За несколько десятков циклов она увеличивает число копий ДНК, а специальный флуоресцентный краситель подсвечивает их в пробирке, сигнализируя о вирусе. Если в биоматериале нет вирусных частиц, ампликонов (продуктов ПЦР) не будет вовсе, результат — отрицательный. Если вируса очень мало, итоговое количество ампликонов по завершении ПЦР окажется за пределами чувствительности прибора и результат — ложноотрицательным.

Тонкости метода

В ПЦР-диагностике много нюансов, объясняет Алексей Чемерис. В лаборатории для научных целей выявляют даже единичные копии вирусного генома в образце, при массовом применении чувствительность обычно на порядки ниже.

«Из-за случайных мутаций генома праймеры могут не сработать, если однонуклеотидные замены или даже более значительные изменения генома вируса пришлись как раз на эти участки. Вероятность невысока, но она есть», — отмечает ученый.

Возможны сбои при ручных операциях, которых не так много. Одна из них — извлечение вирусной РНК из образца. Автоматический экстрактор нуклеиновых кислот стоит довольно дорого, поэтому обычно эту процедуру доверяют лаборанту. Редко, но ложноположительные результаты случаются, в том числе из-за особенностей ПЦР или загрязнения образца.

Чаще всего, однако, проблемы возникают до того, как пробирка попала в лабораторию. Вот что пишут авторы статьи в журнале «Вестник Росздравнадзора»: «В настоящее время имеются неопровержимые доказательства того, что преаналитическая фаза является основным источником ошибок в лабораторных исследованиях, когда они используются для диагностических или исследовательских целей». Они публикуют целый список нарушений, ведущих к ложноотрицательным результатам.

Ключевой этап — подготовка к исследованию. «За три часа до анализа нельзя есть, пить, курить и полоскать рот. Дело в том, что коронавирус поражает клетки слизистой оболочки дыхательных путей. Проникая в них, он начинает размножаться, накапливается на их поверхности. Но есть еще и эпителиальные клетки, которые часто обновляются. Вместе с водой, едой и избытком слюны при курении и жевании жвачки эпителиальные клетки попадают в пищевод. В результате вероятность обнаружить вирус в мазке падает практически до нуля», — комментирует Тамара Силкина, врач клинической лабораторной диагностики, директор по лабораторным технологиям «Гемотеста».

Не менее важна процедура взятия биоматериала. Если неверно выбрать точку для мазка, например, из-за кашля или рвотного рефлекса, на зонд может не попасть достаточное количество клеток. На результат также влияют нарушения технологии хранения, транспортировки образцов.

«Цена ошибки очень высока — процент выявляемости коронавирусной инфекции снизится, а скорость ее распространения вырастет. Люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут чувствовать себя спокойно, выходить в общественные места и контактировать с окружающими», — уточняет представитель «Гемотеста».

Ключевой этап — подготовка к исследованию. «За три часа до анализа нельзя есть, пить, курить и полоскать рот. Дело в том, что коронавирус поражает клетки слизистой оболочки дыхательных путей. Проникая в них, он начинает размножаться, накапливается на их поверхности. Но есть еще и эпителиальные клетки, которые часто обновляются. Вместе с водой, едой и избытком слюны при курении и жевании жвачки эпителиальные клетки попадают в пищевод. В результате вероятность обнаружить вирус в мазке падает практически до нуля», — комментирует Тамара Силкина, врач клинической лабораторной диагностики, директор по лабораторным технологиям «Гемотеста».

Не менее важна процедура взятия биоматериала. Если неверно выбрать точку для мазка, например, из-за кашля или рвотного рефлекса, на зонд может не попасть достаточное количество клеток. На результат также влияют нарушения технологии хранения, транспортировки образцов.

«Цена ошибки очень высока — процент выявляемости коронавирусной инфекции снизится, а скорость ее распространения вырастет. Люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут чувствовать себя спокойно, выходить в общественные места и контактировать с окружающими», — уточняет представитель «Гемотеста».

О точности диагностики

В России одобрены к использованию десятки тест-систем для выявления коронавируса. Ключевые характеристики — диагностические специфичность (точность) и чувствительность. Первый параметр показывает способность набора определить конкретный вирус. Второй — возможность обнаружить его части, даже если в биоматериале их очень мало. «Чем эти параметры ближе к ста процентам, тем лучше», — подчеркивает Тамара Силкина.

«Порог чувствительности — общий как для российских, так и для зарубежных тестов: 10³ на миллилитр. То есть должно быть не менее тысячи вирусных геном-эквивалентов на миллилитр образца. «ДНК-технология» заявила о чувствительности 10¹ — десять вирусных единиц на миллилитр. Другой важный показатель — воспроизводимость, то есть возможность получить одинаковый результат в разных условиях. Нужно учитывать и сходимость — отсутствие существенных различий между измерениями, выполненными в одинаковых условиях», — добавляет медик.

Метод ПЦР с обратной транскрипцией хорошо отработан и практически полностью автоматизирован. С момента попадания в лабораторию анализ занимает четыре-шесть часов. В мире эти тесты буквально поставили на поток. Только в Москве, по официальным данным, сделали 12 миллионов анализов.

Поскольку этот метод прямо выявляет возбудителя в организме, его относят к доказательной медицине и рекомендуют учитывать в клинической практике. Однако анализ больших данных говорит, что при массовом использовании ПЦР-тесты часто промахиваются.

Ложнонегативные результаты получаются в 20-66 процентах случаев. Такие данные из литературы приводят исследователи из Сеченовского университета. Вместе с зарубежными коллегами они изучили записи пациентов, госпитализированных в университетскую клинику в апреле — мае. Из 3480 человек, чьи ПЦР-тесты были доступны, примерно половина оказались чистыми. В то же время клиническая картина и КТ легких указывали на коронавирусную инфекцию. Авторы допускают, что в реальной клинической практике ПЦР-анализ не столь и критичен.

«Этиологическая диагностика, которая выявляет причину заболевания, нужна априори, — не соглашается Айрат Мавзютов, заведующий кафедрой фундаментальной и прикладной микробиологии, профессор кафедры лабораторной диагностики Башкирского государственного медицинского университета, руководитель Исследовательского центра «Лаборатория». — При вирусных инфекциях других, сравнимых по чувствительности и специфичности (точности), методов, кроме ПЦР-тестирования, нет».

Важно понимать, объясняет профессор Мавзютов, что клинический диагноз опирается на субъективные данные — анамнез (опрос) и осмотр пациента. На их основании невозможно установить вирусную природу заболевания и тем более какой именно возбудитель его вызвал. Для этого проводятся лабораторные исследования. Получаемые при этом данные, продолжает ученый, намного объективнее, поскольку большинство современных методов лабораторных исследований автоматизировано. Соответственно, на результаты не повлияют случайные факторы: уровень подготовки специалистов, их настроение, «погода в доме» и так далее.

«Диагноз COVID-19 можно поставить, только когда в материале от больного обнаружили РНК вируса SARS CoV-2 методом ПЦР или же антигены этого вируса иммунохимическими методами. Не выявив следов вируса в организме, нельзя говорить о «ковидной» природе заболевания или летального исхода», — утверждает Айрат Мавзютов.

Он обращает внимание на еще один аспект. ПЦР-тест не отличает РНК вируса, способного к репродукции, то есть размножению, от обломков «нежизнеспособных» вирусных частиц. Он лишь позволяет понять, присутствует или нет РНК коронавируса в клетках.

«Пока инфицированные клетки не заменятся на новые, а на это уходит от двух до четырех недель, не исключены положительные результаты. При этом вирус может быть уже «мертвым», человек здоров и никому не опасен», — отмечает профессор. Для уточнения учитываются данные целого ряда дополнительных исследований, позволяющих на лабораторном уровне оценивать остроту воспалительного процесса или образование антител на стадии его завершения.

Альтернатива ПЦР-диагностике

В любом случае нужно повышать чувствительность тест-систем на основе ПЦР, заключает Алексей Чемерис, а для этого нужны другие подходы. «Надо сделать так, чтобы ложнонегативных результатов было меньше, практически исключить их», — считает он.

В обзоре, подготовленном вместе с коллегами, профессор Чемерис рассматривает преимущества и недостатки ПЦР-диагностики и других методов амплификации — копировании РНК бетакоронавирусов, к которым относится SARS-CoV-2. Теоретически весьма перспективен метод петлевой амплификации — LAMP, где используют сразу шесть или восемь праймеров.

«С одной стороны, повышается специфичность: только когда все праймеры отожгутся (сработают, распознав РНК коронавируса. — Прим. ред.), начнется амплификация, с другой — вирус мутирует и шансы, что реакция не пойдет, увеличиваются, поскольку какие бы участки генома ни выбрать, все равно вероятность мутаций больше в восьми участках, чем в двух или трех (при использовании гибридизационного зонда), достаточных для ПЦР», — объясняет исследователь.

Во время предшествующей эпидемии SARS возбудителя выявляли с помощью реакции NASBA (амплификации на основе секвенирования нуклеиновых кислот) и RCA (репликации по типу катящегося кольца). Геномный редактор CRISPR-Cas также пробуют применять для идентификации РНК нового коронавируса. Есть работы по полногеномному секвенированию любого генетического материала, находящегося в биоматериале. Метод очень чувствительный, но дорогой и долгий — занимает 20 часов. Так что в ближайшее время ПЦР с обратной транскрипцией останется самым массовым способом обнаружения коронавируса в организме.

Источник

COVID-19: КАК ПОДГОТОВИТЬСЯ К СДАЧЕ ПЦР-теста?

В условиях сохранения рисков распространения новой коронавирусной инфекции Роспотребнадзор рекомендует перед сдачей ПЦР-теста учитывать следующие требования.

Можно или нет принимать пищу перед сдачей мазков для теста ПЦР?

По инструкции к наборам для ПЦР-исследования на SARS-CoV-2 взятие мазков рекомендуется проводить не раньше 3-4 часов после последнего приёма пищи. Почему это важно?

Коронавирус SARS-Cov-2 живет внутри эпителиальных клеток. Для ПЦР-исследования важно получить мазок с достаточным количеством инфицированных клеток. В момент проглатывания еды эпителиальные клетки механически слущиваются пищевым комком с поверхности слизистой оболочки. Если взять мазок сразу после еды, в пробирку может попасть недостаточное количество инфицированных клеток. В этом случае, пациент может получить ложноотрицательный результат анализа. То же самое касается питья. Вода смывает с поверхности миндалин, задней стенки глотки инфицированные клетки.

Можно ли пользоваться лекарственными средствами в нос и горло (капли, спреи, антисептики) перед сдачей мазков?

Перед взятием мазков ни в коем случае нельзя использовать лекарственные средства для местного применения (капли, спреи и др). После их применения количество вируса на слизистой снижается и увеличивается вероятность получения ложноотрицательных результатов ПЦР-теста.

Можно ли употреблять алкоголь перед сдачей теста ПЦР и как это повлияет на результат?

Алкоголь содержит этиловый спирт (этанол), который также входит в состав многих антисептических средств. По рекомендациям Роспотребнадзора, для эффективного антисептического действия в составе дезинфицирующего средства должно быть не менее 60-80% этилового спирта. Хотя в состав спиртных напитков (обычно) входит меньше этанола, чем необходимо для дезинфекции, но после приема алкоголя вероятность выявления коронавируса в мазке также может снизиться.

Почему нельзя чистить зубы перед сдачей теста ПЦР?

Основная цель на этапе взятия мазков для ПЦР-исследования – получить биологический материал с достаточным количеством клеток, пораженных коронавирусом. Применение любых очищающих средств для полости рта снижает количество вируса в получаемом мазке. Зубная паста может содержать антисептические компоненты. Попадание ее остатков в пробирку с мазком может мешать проведению анализа. Кроме того, чистка зубов требует еще и дополнительного полоскания рта, что также не рекомендовано перед забором биоматериала.

Применение косметики (помады, блески и бальзамы для губ) может повлиять на результат теста?

Материал для исследования берут не из полости рта, а из зева и носоглотки. Если соблюдать все правила взятия мазка и не прикасаться зондом к губам, то наличие декоративной косметики не должно помешать получению адекватного материала для ПЦР-теста. Но при случайном попадании в пробу косметические средства могут замедлить ПЦР-реакцию. Поэтому лучше декоративную косметику нанести уже после того, как мазок был взят.

Откуда все-таки берут мазок – из зева или носоглотки?

И из зева, и из носоглотки. Входными воротами для вируса SARS-CoV-2 являются верхние дыхательные пути. После попадания на слизистые носо- и ротоглотки (зева) вирус начинает размножаться в эпителиальных клетках. Поэтому в конце инкубационного периода и в первые дни клинических проявлений наиболее информативными являются мазки именно из этих областей. Для исследования мазок берут с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки. При взятии мазка из носоглотки зонд вводят по наружной стенке носового хода на достаточную глубину. Мазок, взятый со слизистой преддверия носа, может не выявить РНК коронавируса SARS-CoV-2.

Важно! Минимум за 3 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) нельзя: принимать пищу, пить, чистить зубы, полоскать рот/горло, использовать спрей-освежитель для ротовой полости, жевать жевательную резинку, курить. Минимум за 3 часа до взятия мазков из носоглотки нельзя: промывать нос, использовать спреи, капли, мази для носа. За два дня до взятия мазка рекомендуется отказаться от употребления спиртных напитков.

Источник

Сдача ПЦР теста на Ковид-19

Коронавирус проникает в организм через органы дыхания. После попадания на слизистую носа и ротоглотки он начинает активно размножаться в клетках эпителия. Данный процесс происходит наиболее активно в конце латентного периода и начале проявления клинических симптомов.

Для ПЦР исследования лучше всего подходит биологический материал в виде мазка с поверхности миндалин, небных дужек, задней стенки ротоглотки и носоглотки. Дальнейший анализ помогает подтвердить наличие или отсутствие фрагментов вируса во взятом материале. Сдача мазка на коронавирус – простой и доступный способ узнать об инфицировании, но не единственный.

Содержание статьи:

Принцип ПЦР исследования

ПЦР с наибольшей вероятностью выявляет возбудителя. Исследованию подлежат различные биологические материалы:

Полученные образцы подлежат дальнейшей обработке химическим веществом. Данная процедура позволяет выделить фрагменты генетического материала возбудителя. Следующий этап исследования – выявление чужеродных нуклеиновых кислот с помощью компьютера.

Сдача мазка на ковид позволяет получить точный результат, даже если микрочастиц возбудителя содержатся мало, и отсутствуют клинические симптомы. ПЦР помогает ответить на главный вопрос: имеется ли заражение. Выяснить, когда контактировал организм человека с вирусом, а также стадию заболевания не представляется возможным. Для этого используются другие лабораторные методы.

Кому нужно пройти ПЦР диагностику на коронавирус?

Взятие мазков на коронавирус потребуется в следующих случаях:

Как берут мазок?

Техника взятия мазка проста и состоит из следующих этапов:

Как подготовиться?

Подготовка к процедуре заключается в том, что не следует за час до нее выполнять определенные действия:

За сутки необходимо не употреблять спиртные напитки.

Неправильная подготовка может привести к получению ложноотрицательного результата.

Как транспортируют биоматериал?

Записаться на сдачу мазка на Ковид-19

Данная запись является предварительной и не гарантирует забронированную дату.

Пожалуйста дождитесь звонка оператора для подтверждения записи.

Перенос или отмена записи: +7 (495) 109-70-70

Часто задаваемые вопросы

Что лучше сдать – мазок или кровь?

С помощью мазка удается обнаружить вирус в 90% случаев, при этом у человека могут быть выражены симптомы или отсутствовать. После выздоровления ковидная инфекция не обнаруживается в мазках.

В крови в процессе исследования ищут антитела, которые представлены иммуноглобулинами. С их помощью удается с максимальной точностью узнать стадию заболевания. В начале инфицирования (первые 7 дней) метод неэффективен. Антитела обнаруживаются в крови длительное время после выздоровления.

Особенность проведения экспресс-теста на антитела:

Особенности проведения ПЦР:

Опасно ли взятие мазка на коронавирус для здоровья?

Чтобы правильно сделать мазок, следует ввести зонд в носовой ход не менее, чем на 8–10 см, чтобы он достиг места, где носовая полость переходит в горло. Именно здесь вирусные частицы присутствуют в большом количестве.

Манипуляция не представляет опасности для здоровья человека. Отрицательный момент заключается в том, что многие пациенты во время процедуры испытывают неприятные ощущения в виде жжения, боли, позывов на рвоту. Взятие материала длится несколько секунд, после чего дискомфорт проходит.

Можно ли сдать анализ коллективно?

В крупных населенных пунктах диагностические центры проводят единовременное тестирование сотрудников предприятий, организаций с целью выявления источника инфекции и определения последующих действий, например наложение карантина, проведение лечения. Медицинские работники самостоятельно выезжают и на месте проводят взятие мазков.

Если забирает скорая с подозрением на ковид, то они делают анализ?

Основное предназначение скорой медицинской помощи – проведение безотлагательных мероприятий, устраняющих нарушения функционирования жизненно важных органов. К обязанностям сотрудников скорой помощи не относится обследование на коронавирусную или иную инфекцию.

Если у человека проявляются симптомы ковида, которые сопровождаются одышкой, высокой температурой, ухудшением общего самочувствия, то его госпитализируют в инфекционное отделение.

Что делать, если тест на ковид положительный, а симптомов нет?

Не всегда инфекционный процесс заканчивается развитием клинических симптомов заболевания. То же самое следует сказать про коронавирусную инфекцию. После проникновения в организм возбудителя у некоторых людей хорошая иммунная защита не дает проявиться характерным признакам.

В тоже время вирусные частицы присутствуют в организме, что подтверждает результат теста. В данном случае человек является носителем и одновременно источником инфекции, представляя опасность для окружающих. Все, что нужно делать в такой ситуации – остаться дома на самоизоляции на время, пока тест не покажет отрицательный результат.

Где пройти ПЦР тест на коронавирус? Можно ли дома?

Мазок на коронавирусную инфекцию можно сдать бесплатно. Но в данном случае без направления врача не обойтись. Взятие биологического материала может происходить в поликлинике, стационаре, а также в домашних условиях. К данному мероприятию имеют отношение сотрудники Роспотребнадзора, которые подключили к этому государственные лабораторные центры.

Если нет желания долго стоять в очереди, чтобы взять направление, а потом пройти исследование, можно обратиться в частную клинику «Чудо Доктор».

К основным преимуществам учреждения, кроме отсутствия очереди, относятся:

Специалисты клиники выезжают для взятия мазка в пределах МКАД.

Можно ли сделать самостоятельный забор мазка?

Самозабор мазка на ковидную инфекцию не исключен. К данному способу имеет смысл прибегать лишь в крайнем случае. Следует помнить, что не все лаборатории принимают полученный подобным образом материал. Непрофессионал не сможет провести процедуру качественно, как врач, что отразится на результате.

Перед самозабором необходимо ознакомиться с инструкцией. Не следует вводить зонд глубоко, поскольку можно травмировать слизистую оболочку, а также спровоцировать рвоту, чихание. Передавая или принимая полученный материал, важно придерживаться мер, снижающих распространение инфекции.

Сколько раз берут мазок?

Мазок на коронавирус SARS-CoV-2 берется дважды. Первый раз – на первый день, а второй – на 3 день при условии, что клинические симптомы не проявляются. Если приходится постоянно контактировать с ковидными больными (например, медицинским работникам), то ПЦР-диагностика проводится раз в неделю.

Наличие симптомов – кашля, одышки – обязывает сдавать анализы не менее 3 раз. Точка отсчета – день обращения человека к специалисту. Любые сомнительные случаи являются поводом для проведения дополнительного тестирования.

Через какое время будут готовы результаты?

Результаты исследования зависят от его вида. Как правило, удается ознакомиться с полученными данными спустя 5–7 суток, а при экспресс-тестировании – через 1 сутки. Результаты последнего имеют погрешности и требуют дополнительной проверки.

Где и как узнать результаты?

Если мазок был сдан бесплатно, то результат следует узнавать у врача поликлиники. При отрицательном тесте информация подается в статистический центр. При положительном результате данные передаются Роспотребнадзору, в том числе, если исследование проводилось в частной клинике.

Материал с положительной ПЦР доставляется в эпидемиологический центр, где анализируется мазок. В связи с высокой загруженностью результат может быть получен спустя несколько дней.

Если анализ был сдан в клинике «Чудо Доктор», то результат отправляется на электронную почту, а также с ним можно ознакомиться в личном кабинете на сайте.

Источник

• ← Что нужно сделать чтобы пцр был отрицательный результат
• Что нужно сделать чтобы пцр был положительный →